葡聚糖凝胶是一种具有三维网状结构的高分子化合物,它是由葡聚糖加入交联剂环氧氯丙烷通过醚键互相交联聚合而成的,交联度越大,网孔结构就越紧密,吸水后的体积膨胀就越小,能允许进入凝胶内部的分子的分子量也就越小,反之亦然.层 析时,大于凝胶孔径的大分子,被阻于凝胶相外,沿着凝胶颗粒之间的间隙走,下移速度快,故洗脱下来,中分子物质部份进入凝胶内部,洗脱速度为其次,而小分子物质因全部进入凝胶,受到阻力,故被洗脱下来,如此物质得到分离.型号G表明每克于凝胶吸水量的多少,例G-25表明每克干凝脱胶吸水2.5毫升.这表征了凝胶所能膨胀的倍数,亦间接表征了凝胶孔径的大小.
凝胶目数表明颗粒的大小,目数值越大,颗粒愈细,分离效果愈好,但粒子太细将影响流速,造成洗脱时间过长,易造成生物制品的变质.反之,粒子太粗则洗脱过快,峰型不集中,分离效果不佳.
装柱前,凝胶须充分膨胀,若在柱中尚继续膨胀,会造成凝胶挤压变形,堵塞通道,失去分离性能.对于G-75上的软胶,尤其要注意.软胶还须十分注意不要超工作压力运作,因为软胶的钢性较小,容易挤压变形,导至柱子堵塞,此外,长期使用常会引入一些不溶解杂质或因压得较紧而流速渐减,故必要时应洗胶并重新装柱.
国产凝胶的粒度分级往往不是很彻底,凝胶经膨胀后装柱前,应倾去在水中难已沉淀的极细微粒,免使影响流速.
Sephadex G型主要物理性质 膨胀时间
型号 吸水量ml/g 床体积ml/g 分离范围 [肽类和球蛋白] 工作压力[cm水压] [沸水浴]
G-10 1 2~3 70 >100 1小时
G-15 1.5 2.5~3.5 1500 >100 1小时
G-25 2.5 4~6 1000-5000 >100 1小时
G-50 5.0 9-11 1500-30000 >100 2小时
G-75 7.5 12-15 3000-70000 50 3小时
G-100 10.0 15-20 4000-150000 35 5小时
G-150 15.0 20~30 5000-400000 15 5小时
G-200 20.0 30~40 5000-800000 10 5小时